Der Oxidase-Test ist ein einfaches und schnelles biochemisches Verfahren zum Nachweis des Enzyms Cytochrom-c-Oxidase in der Atmungskette von Zellen. Der Oxidase-Test wird genutzt zur Klassifikation von Bakterien (Bunte Reihe) und in der Histologie. Das Oxidase-Reagenz reduziert über Cytochrom c die Cytochrom-c-Oxidase. Dabei wird das farblose Reagenz zu einem intensiv gefärbten Radikal-Kation (Wurster-Kation) oxidiert.
Der Oxidase-Test ist spezifisch für Cytochrom-c-Oxidasen. Chinol-Oxidasen reagieren hierbei nicht.
Oxidase-Reagenzien Es gibt drei verschiedene Oxidase-Reagenzien:
Kovacs-Reagenz Das Kovacs-ReagenzN. Kovacs (1956): Identification of Pseudomonas pyocyanea by the oxidase reaction. In: Nature. Bd. 178, S. 703. PMID 13369512 ist eine Lösung aus 10 mg/ml N,N,N′,N′-Tetramethyl-1,4-Phenylendiamin (TMPD) in 100 mM Phosphat-Puffer (pH 7). Ein Bakterium ist Oxidase-positiv, wenn sich innerhalb einer Minute nach Zugabe des Reagenz eine intensive Blaufärbung (Wurster-Blau) der Zellen einstellt. Bei keiner oder einer späteren Reaktion ist das Bakterium Oxidase-negativ.
Gordon-McLeod-Reagenz Das Gordon-McLeod-ReagenzJ. C. Gordon & J. W. McLeod (1928): The practical application of the direct oxidase reaction in bacteriology. In: J. Path. Bact. Bd. 31, S. 185. ist eine Lösung aus 10 mg/ml N,N-Dimethyl-1,4-Phenylendiamin (DMPD) in 100 mM Phosphat-Puffer (pH 7). Ein Bakterium ist Oxidase-positiv, wenn sich innerhalb einer Minute nach Zugabe des Reagenz eine intensive Rotfärbung (Wurster-Rot) der Zellen einstellt. Bei keiner oder einer späteren Reaktion ist das Bakterium Oxidase-negativ.
NADI-Reagenz Das NADI-ReagenzC. M. Carpenter et al. (1947): The oxalate salt of p-aminodimethylaniline, an improved reagent for the oxidase test. In: Science. Bd. 105, S. 649–650. W. L. Gaby & C. Hadley (1957): Practical laboratory test for the identification of Pseudomonas aeruginosa. In: J. Bacteriology. Bd. 74, S. 356–358. PMID 13475249, . (nach EhrlichP. Ehrlich (1885): Das Sauerstoffbedürfnis des Organismus. Eine farbenanalytische Studie. Habilitationsschrift, Universität Berlin.) ist eine Mischung aus gleichen Volumenteilen 50 mM α-Naphthol-Lösung in 50 Vol-% Ethanol und 10 mg/ml N,N-Dimethyl-1,4-Phenylendiamin-Lösung (DMPD) in 100 mM Phosphat-Puffer (pH 7). Ein Bakterium ist Oxidase-positiv, wenn sich innerhalb einer Minute eine intensive Blaufärbung (Indophenolblau) der Zellen einstellt. Bei keiner oder einer späteren Reaktion ist das Bakterium Oxidase-negativ.
Literatur
Kategorie:Mikrobiologisches Testverfahren Kategorie:Biochemische Nachweisreaktion