Die T5-Exonuklease () ist ein Enzym aus der Gruppe der Nukleasen (Exonukleasen) und wird vom Bakteriophagen T5 gebildet.
Eigenschaften Die T5-Exonuklease dient während der Infektion von Escherichia coli dem Bakteriophagen bei der DNA-Replikation des viralen Genoms. Sie katalysiert als Exonuklease die Hydrolyse der endständigen Nukleotide von DNA-Doppelsträngen mit blunt ends in 5'→3'-Richtung unter Freisetzung von Nukleosid-5'-Phosphat. Bei 5'-gabelnder DNA schneidet die T5-Exonuklease als Endonuklease an der Verbindung zwischen einzelsträngiger und doppelsträngiger DNA. Die einzelsträngige DNA muss dafür ein freies 5'-Ende aufweisen. Die T5-Exonuklease bindet DNA mit Pseudo-Y-Struktur mit einer Dissoziationskonstante von 5 nM−1.S. J. Garforth, T. A. Ceska, D. Suck, J. R. Sayers: Mutagenesis of conserved lysine residues in bacteriophage T5 5'-3' exonuclease suggests separate mechanisms of endo-and exonucleolytic cleavage. In: Proceedings of the National Academy of Sciences. Band 96, Nummer 1, Januar 1999, S. 38–43, PMID 9874768, . Cofaktoren sind drei zweiwertige Magnesiumionen, wovon zwei für die Nukleaseaktivität notwendig sind.K. Syson, C. Tomlinson, B. R. Chapados, J. R. Sayers, J. A. Tainer, N. H. Williams, J. A. Grasby: Three metal ions participate in the reaction catalyzed by T5 flap endonuclease. In: The Journal of biological chemistry. Band 283, Nummer 42, Oktober 2008, S. 28741–28746, , PMID 18697748, . Die Reaktion erfolgt auch mit anderen zweiwertigen Kationen außer Calciumionen.S. J. Garforth, D. Patel, M. Feng, J. R. Sayers: Unusually wide co-factor tolerance in a metalloenzyme; divalent metal ions modulate endo-exonuclease activity in T5 exonuclease. In: Nucleic acids research. Band 29, Nummer 13, Juli 2001, S. 2772–2779, PMID 11433022, . Das pH-Optimum der Exonuklease liegt bei 9,3 und bei 5,5 für die Endonuklease.
Anwendungen Die T5-Exonuklease wird in der Biochemie unter anderem zum Gibson Assembly eingesetzt.R. M. Benoit, C. Ostermeier, M. Geiser, J. S. Li, H. Widmer, M. Auer: Seamless Insert-Plasmid Assembly at High Efficiency and Low Cost. In: PloS one. Band 11, Nummer 4, 2016, S. e0153158, , PMID 27073895, .D. G. Gibson: Enzymatic assembly of overlapping DNA fragments. In: Methods in enzymology. Band 498, 2011, S. 349–361, , PMID 21601685.
Weblinks
Einzelnachweise
Kategorie:Protein Kategorie:Nukleinsäure-Methode