Die Taq-DNA-Ligase ist ein Enzym aus der Gruppe der DNA-Ligasen und wird von Thermus aquaticus gebildet.
Eigenschaften Die Taq-DNA-Ligase erzeugt je eine Phosphodiesterbindung zwischen zwei aneinandergrenzenden DNA-Sequenzen in DNA-Doppelsträngen und dient der Bakterie zur DNA-Replikation, Rekombination und zur DNA-Reparatur. Cofaktoren sind zweiwertige Magnesiumionen.
Die Taq-DNA-Ligase katalysiert die Reaktion:
NAD+ + (Desoxyribonukleotid)(n) + (Desoxyribonukleotid)(m) AMP + beta-Nicotinamid-D-ribonukleotid + (Desoxyribonukleotid)(n+m)
Anwendungen Die Taq-DNA-Ligase wird im Zuge einer künstlichen Gensynthese zur mehrfachen, parallelen Ligation jeweils zweier DNA-Doppelstränge aneinander verwendet,D. G. Gibson: Enzymatic assembly of overlapping DNA fragments. In: Methods in enzymology. Band 498, 2011, S. 349–361, , PMID 21601685. ist jedoch bei einer Verwendung der Gibson Assembly zur Klonierung nicht notwendig.R. M. Benoit, C. Ostermeier, M. Geiser, J. S. Li, H. Widmer, M. Auer: Seamless Insert-Plasmid Assembly at High Efficiency and Low Cost. In: PloS one. Band 11, Nummer 4, 2016, S. e0153158, , PMID 27073895, . Die Taq-Ligase wird im Zuge einer PCR-Optimierung zur Erzeugung langer Produkte eingesetzt, jedoch unabhängig von der Ligase-Aktivität.K. B. Ignatov, V. M. Kramarov: DNA ligases from thermophilic bacteria enhance PCR amplification of long DNA sequences. In: Biochemistry. Biokhimiia. Band 74, Nummer 5, Mai 2009, S. 557–561, PMID 19538130. Weiterhin wird die Taq-DNA-Ligase zur Ligase-Kettenreaktion eingesetzt.M. Wiedmann, W. J. Wilson, J. Czajka, J. Luo, F. Barany, C. A. Batt: Ligase chain reaction (LCR)–overview and applications. In: PCR methods and applications. Band 3, Nummer 4, Februar 1994, S. S51–S64, . PMID 8173509. (PDF).
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Einzelnachweise
Kategorie:Protein Kategorie:Nukleinsäure-Methode Kategorie:Gentechnik