mini|GFP aus Aequorea victoria, Wildtyp-Form
roGFP ( Redox-sensitive GFP) ist eine veränderte Variante des grün fluoreszierenden Proteins, bei der sich die Fluoreszenz redox-abhängig ändert.K. A. Lukyanov, V. V. Belousov: Genetically encoded fluorescent redox sensors. In: Biochimica et Biophysica Acta. Band 1840, Nummer 2, Februar 2014, S. 745–756, . (freier Volltext). PMID 23726987.
Eigenschaften roGFP besitzt im Vergleich zur Wildtyp-Form des GFP zwei Cysteine in der β-Barrel-Struktur des GFP an den Positionen 147 und 204 auf zwei benachbarten β-Strängen in der zytosolischen Variante des roGFP1 (Mutationen C48S, S147C). Durch Oxidation der Thiolgruppen der Cysteine wird Cystin gebildet, was sich in einer Blauverschiebung der Fluoreszenz des roGFP auswirkt.C. T. Dooley, T. M. Dore, G. T. Hanson, W. C. Jackson, S. J. Remington, R. Y. Tsien: Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators. In: The Journal of biological chemistry. Band 279, Nummer 21, Mai 2004, S. 22284–22293, . . PMID 14985369.
Anwendungen Das roGFP wird unter anderem als redox-abhängiger Biosensor und als Reporterprotein verwendet. Mit roGFP kann das Redox-Potential und die Menge an Glutathion im Zytosol in vivo bestimmt werden, indirekt auch Wasserstoffperoxid.S. G. Rhee, T. S. Chang, W. Jeong, D. Kang: Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells. In: Molecules and cells. Band 29, Nummer 6, Juni 2010, S. 539–549, . . PMID 20526816. Als Fusionsprotein des roGFP mit Glutaredoxin 1 kann die Fluoreszenz erhöht werden.
Im endoplasmatischen Retikulum kann mit roGFP2 (Mutationen C48S, S147C, S65T) die Bildung von ROS verfolgt werden.
Alternative optische Nachweisverfahren verwenden z. B. Resazurin (synonym AlamarBlue), Dichlorofluorescein (DCF) oder die Proteine HyPer oder rxYFP.S. Pouvreau: Genetically encoded reactive oxygen species (ROS) and redox indicators. In: Biotechnology journal. Band 9, Nummer 2, Februar 2014, S. 282–293, . . PMID 24497389.
Weblinks roGFP1-R7 in oxidierter Form roGFP1-R8 in reduzierter Form
Einzelnachweise
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